Q1.可以用模擬樣本溶液+國際校準品做企業(yè)參考品嗎？

可以

Q2.定量參考品可以沒有陰性參考品嗎？

根據(jù)產品性能決定。定量產品參考品一般至少包括準確度參考品、線性參考品、精密性參考品、靈敏度參考品，根據(jù)不同產品性能有些還包含特異性參考品、陽性參考品、陰性參考品、亞型檢測能力參考品等。

Q3.在沒有國家參考品、已上市試劑盒的情況下，檢驗病毒類的產品參考品賦值的方法或者單位應該是什么？（TCID50？）

使用生物學單位（TCID50/PFU）用于參考品賦值是目前趨勢。企業(yè)也可以用數(shù)字PCR等方法建立拷貝數(shù)（U）與TCID50之間的濃度對應關系后，用拷貝數(shù)單位賦值。

Q4.參考品樣本有比較規(guī)范的獲得方式嗎？

建議直接與機構簽署科研臨床協(xié)議獲得臨床樣本。

Q5.不確定度怎么評估？（多批 效期重復）

不確定度用以表征準確度，此概念多用于定性產品，通常用陽性/陰性符合率表示試劑的準確度。評估不確定度的基本思想是誤差的類型對測量結果的使用者來說是不重要的，因為是所有誤差的凈效應決定測量結果的不確定度，包括整個溯源鏈中的所有變異分量。對于定性產品。例如產品穩(wěn)定性研究中，不確定度研究方法是使用多批次產品，在效期內不同階段，檢查參考品的陽性/陰性符合率。

Q6.引物，探針，dNTP，酶等外購的可以直接用供應商的COA，全部配在一起做一功能性試驗嗎？還需要按照指導原則和標準做濃度，純度，堿基缺失率，序列一致性，HPLC嗎？

可以用供應商的COA，但不建議一起做功能性試驗。

Q7.主要原材料自身發(fā)生變化的，如抗體本身發(fā)生變化的，是要重新注冊嗎？

需要。

Q8.主要原材料研究和反應體系研究中，是否需要用整套參考品去做，還是有選擇性的挑選來做，挑選的原則是怎么樣的？

不需要。挑選有代表性的陽性和交叉陰性參考品。

Q9.請問免疫類試劑盒檢測的是病毒的某個抗原（比如結構蛋白），參考品是應該設置為全病毒（活的）還是陰性樣品+抗原蛋白？如果參考品是全病毒，賦值應該是對”病毒數(shù)“賦值，還是對抗原蛋白含量進行賦值？

優(yōu)先選擇臨床樣本。對于難以獲得可選擇毒株，病毒數(shù)建議用TCID50或者PFU。

Q10.做分析性能驗證主要原材料需要有2個批次的要求嗎？

需要。

Q11.請問企業(yè)參考品需要體現(xiàn)在技術要求中嗎（三類IVD）？

需要3個批次轉產后的產品。

Q12.遺傳病染色體微缺失微重復的樣本賦值采用什么方法？（定性的產品）

用臨床參考方法如CMA、FISH等進行賦值。

Q13.組織切片類標準品如何制備，組織切片做參考品的話，怎么溯源？

制備：購買權威機構認可或發(fā)補的有證標準物質（CRM），制造商通過使用標準測量程序測量賦值,將有證參考物質的正確度傳遞給產品校準品。組織切片參考品溯源：參考品溯源的重點是計算量溯源，及賦值，另外樣本信息溯源等。參考品計算量溯源可以通過有證標準物質（CRM）和普遍認可的測量程序來實現(xiàn)。

Q14.最低檢測IFU是怎么做到的？？

例如，可以采用已測定IFU（TCID50或PFU）濃度的樣本進行梯度稀釋，以95%檢出率的最低濃度作為LoD。

Q15.沒有國參的病毒，拷貝數(shù)怎么確定？分光光度法跟分子量計算嗎？

如有標準物質（計量院等單位購買），采用有證標準物質和數(shù)字PCR檢測，確定拷貝數(shù)；如沒有標準物質，可以自己用質粒建立后者直接用數(shù)字PCR定量。分光光度法和分子量計算方法精度不夠，一般不推薦使用。

Q16.TCID50，同一種，但不同來源病毒都不一樣，與拷貝數(shù)關聯(lián)只能代表已做相關性驗證的這個病毒的關系，如何外推至其他同種病毒？

同一來源的病毒株不同生長周期的TCID50和拷貝數(shù)關系也不一樣，通常選取病毒主要流行地發(fā)病期的病毒株進行細胞培養(yǎng)，建立TCID50和拷貝數(shù)的關系，其它病毒株以此為參考。

Q17.請問企業(yè)參考品是在產品成型后制備？還是最初制備，引物探針等篩選時采用參考品進行篩選？

企業(yè)參考品在轉產前原材料研究階段完成。引物探針等的性能驗證試驗可能需要使用參考品來驗證。

Q18.USP參考物質可以當作國際標準品嗎？

如境內沒有可以。一般優(yōu)先選用擬上市地區(qū)認可標準品。

Q19.企業(yè)參考品怎樣規(guī)避hook效應造成的影響？

先確定HOOK效應的濃度，然后控制參考品濃度。

Q20.陰性參考品里可以不放交叉樣本嗎？把交叉放到性能分析里。

陰性參考品需要設置有代表性的交叉樣本。特異性研究中需要更全面的研究可能造成交叉反應的型別或類型。

Q21.核酸類產品組份中有陽、陰性參考品，是由外方一先合成的工程菌，再由外方二進行的擴培后供給我們作為陽、陰參考品的原材料，那我們技術要求中，原材料的供應商怎么寫呢？

外方二。

Q22.工藝性能研究實驗時，只做了配套儀器質控，沒做申報試劑的質控，有什么影響嗎？

工藝及反應體系研究中需要進行體系有效性驗證，包括參考品質控體系、檢驗試驗試劑盒質控品質控體系等。

Q23.企業(yè)參考品基質必須要與臨床樣本保持一致嗎？

絕大多數(shù)要求一致。也有特殊情況，例如產品是通過多種檢測物與各自閾值比較的結果采用算法綜合評分出具診斷結果，而人源陰性樣本中經(jīng)常出現(xiàn)隨機單種檢測物結果高于閾值的情況，然后在提供充分證據(jù)后，可以設置單種檢測物參考品時其他基質。