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文章來源：原博士帶你做檢測作者：原博士
采樣作為檢測的第一個環節，采樣質量的高低直接影響后續一系列檢測的結果，而這個環節也是最容易被忽視的，專門的研究也很少。大部分標準里對采樣只有一個大概的要求，有些標準里泛泛的提到了采樣拭子的材質。
作為一個愛鉆牛角尖的檢測直男，不禁發出了一系列的靈魂拷問：為什么不推薦棉質拭子？棉拭子到底差在哪？不同品牌的尼龍拭子在性能上就完全一樣嗎？實驗室該怎么去評價采樣拭子呢？?
魯迅曾經說過“何苦胡思亂想，干就完了！”于是我花了幾個月的時間去構思試驗方案，試驗斷斷續續做了2個月，在國慶節寫出來跟大家分享。
一、采樣拭子的相關規范
國家衛健委《新冠肺炎實驗室檢測技術指南（第三版）》中標本采集方法中規定：
不知為何在后續的版本中把拭子材質的規定刪除了。但是在《新冠病毒核酸10合1混采檢測技術規范》中明確規定，“采樣拭子宜選用聚酯、尼龍等非棉質、非藻酸鈣材質的拭子，且柄部為非木質材料。折斷點位于距拭子頭頂端3cm左右，易于折斷。”
美國CDC在《InterimGuidelines for Collecting, Handling, and Testing Clinical Specimens fromPersons for Coronavirus Disease 2019 (COVID-19) 》也提到“Use only synthetic fiber swabs with plastic or wire shafts.?Do not use calcium alginate swabs or swabs with wooden shafts,as they?may?contain substances that inactivate some viruses and inhibit PCR testing.?”
先介紹下常用的幾種類型采樣拭子：
1.醫用棉簽
最常見的木柄棉質拭子，優點是便宜易得，缺點是可能抑制PCR反應（美國CDC用了一個“may”，讓我百思不得其姐），木柄不易折斷，不適合病毒采樣。
2.人造絲拭子
聚酯纖維、滌綸或人造絲頭，柄部為塑料或鋁的拭子，采用纏繞方式生產的拭子，適用于病毒學檢驗標本的采集。
3.植絨拭子
由尼龍纖維經噴霧技術制成，吸水和釋放性更好，目前廣泛應用于新冠等呼吸道病毒采樣。
4.3D打印拭子
這個東西到底怎么樣我也不知道，碰巧查到了大家了解一下吧。
關于采樣拭子的評價指標我從吸水量、病毒釋放率、病毒穩定性等幾個指標進行評價，由于我沒有查到相關的標準所以評估有可能不夠全面和科學，希望專業人士進行批評指正。鑒于知識產權的因素本文未公開全部數據，請大家諒解。
1.吸水量
吸水量體現的是不同材質的拭子的吸水能力，通常吸水能力越強越好。將不同材質的拭子在相同體積的液體中浸泡，然后拿出拭子計算每種拭子的吸水量。
試驗結果：吸水量 棉簽>植絨>人造絲
討論：由于三種拭子的拭子頭大小不一樣，棉簽的頭比較大所以吸水量也比較大，應該在相同大小的拭子頭下進行評估會更準確，但是每個廠家生產出來的就是大小不一，所以本實驗也具有一定代表性。
2.病毒釋放率
病毒釋放率體現的是不同材質的拭子吸附病毒后的釋放效率，病毒釋放率越高，采樣獲得的病毒越多。考慮到臨床采樣的多樣性，我綜合考慮了在拭子完全濕潤的情況下和采樣后干燥狀態下兩種情況的病毒釋放率。
2.1濕拭子病毒釋放率
本試驗是與吸水量試驗一起做的，在相同體積的PBS中加入等量病毒后，三種拭子浸泡后放入另一個等體積的PBS中，然后使用qPCR檢測溶液中的病毒含量。
試驗結果：濕拭子病毒釋放率棉簽略好于植絨，明顯好于人造絲
討論：由于棉簽的吸水量是植絨的1.5倍，釋放結果上棉簽略好于植絨，如果計算在相同吸水量的病毒釋放率，植絨的病毒釋放率最高。
2.2干拭子病毒釋放率
本試驗使用三種拭子蘸取含有等量病毒的全血，待拭子干燥后，然后放入等體積PBS中，使用qPCR檢測溶液中的病毒含量。
試驗結果：干棉簽病毒釋放率：植絨>棉簽>人造絲?；浸泡時間5min明顯好于1min。
討論：本試驗采完樣使樣品干燥后再浸泡到PBS中，模擬臨床上某些采樣場景，植絨拭子好于其他拭子，浸泡5min明顯好于浸泡1min，提示我們對于干棉簽拭子需要在溶液中充分浸泡。
綜上筆者認為植絨拭子在病毒釋放率上是這三種拭子中最好的。
3.病毒穩定性
本試驗考察的是在有無病毒保存液和不同溫度下病毒在拭子共存下的穩定性
試驗結果：在無病毒保存液的情況下4℃植絨最穩定，37℃均發生降解，植絨降解的程度最小，棉簽降解最大：在有病毒保存液存在的情況下4℃和37℃病毒均未發生降解。
討論：無論何種材質的拭子，采樣后加入病毒保存液均能有效防止病毒降解。而在不加病毒保存液的情況下，采樣后立刻放入4度保存也能有效防止病毒降解，但是在不加病毒保存液又高溫的情況下，病毒均會發生不同程度的降解，植絨降解的程度最小，棉簽降解最大。
4.其他因素
除了上述指標外其實還需要考慮：不同的病毒、不同類型樣品（污水、食品、糞便、泥土等）、不同品牌的樣品保存液、不同廠家生產的拭子等對采樣的影響。
5.總結：
植絨拭子在病毒釋放率和穩定性上均優于本試驗中的其他材質；人造絲這次試驗中較差，不知是否與本次試驗選擇的拭子有關，后續還有待進一步評估；棉簽雖然吸水量最大但是釋放率不如植絨，棉拭子在37度無保護液存在的情況下病毒降解最多可能與美國CDC提到的“they?may?contain substances that?inactivate some viruses?and inhibit PCR testing.?”有關，暫時未發現棉簽含有抑制PCR反應的成分。
總之，檢測是一個細節決定成敗的行業。在一個檢測流程中有無數細節可以使檢測結果南轅北轍，同樣也有無數細節可以持續改進，使檢測結果越來越逼近真相。
文章來源：原博士帶你做檢測，版權及最終解釋權歸原平臺所有。
